霉菌和酵母菌總數(shù)是化妝品衛(wèi)生質(zhì)量控制的重要指標(biāo)之一，不同國家和地區(qū)化妝品衛(wèi)生技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)中普遍將其列為檢驗內(nèi)容。我國目前主要依據(jù)《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015年版）中霉菌和酵母菌檢驗方法（以下簡稱“ 標(biāo)準(zhǔn)方法”）進行檢測，具體方法為采用虎紅培養(yǎng)基（pH值6.0±0.2），培養(yǎng)溫度為（ 28±2）℃，培養(yǎng)時間為5d，產(chǎn)品前處理稀釋劑為生理鹽水，制成1:10 、1:100和1:1000的檢液?；跇?biāo)準(zhǔn)方法的培養(yǎng)條件，鄭萍等、王似錦等研究均表明通過在虎紅培養(yǎng)基中添加卵磷脂和吐溫80 等中和劑，能夠部分消除化妝品中防腐劑的抑菌作用，可提高化妝品中霉菌和酵母菌的檢出率。

筆者課題組前期針對化妝品中常見污染的霉菌和酵母菌培養(yǎng)特性開展了系統(tǒng)研究，通過優(yōu)化培養(yǎng)條件和添加中和劑等方式，建立了一套改良的化妝品中霉菌和酵母菌3d檢驗方法（以下簡稱“MSDA方法”）。MSDA方法的培養(yǎng)基為改良SDA（pH值7.0±0.2），培養(yǎng)溫度為（28±2）℃，培養(yǎng)時間為3d，產(chǎn)品前處理稀釋劑為改良卵磷脂肉湯（ MLBTL，添加1％卵磷脂和1.5％吐溫80作為中和劑），制成1:10和1:100檢液。該方法縮短了霉菌和酵母菌的檢測時間，提高了檢測效率。

目前國內(nèi)外尚無關(guān)于化妝品中微生物檢驗方法驗證指導(dǎo)原則。為探討MSDA方法用于化妝品霉菌和酵母菌檢驗的可行性，本研究參照《中國藥典》藥品微生物檢驗替代方法驗證指導(dǎo)原則，以化妝品中常見污染的青霉、曲霉、枝孢霉、根霉、紅酵母、念珠菌等真菌代表性菌株作為試驗菌，驗證MSDA方法在準(zhǔn)確度、精密度、定量限、線性、范圍、重現(xiàn)性、耐用性等7個參數(shù)與標(biāo)準(zhǔn)方法是否存在顯著性差異。選取30種含不同防腐劑體系的化妝品產(chǎn)品，依據(jù)《中國藥典》計數(shù)方法適用性試驗要求，對MSDA方法的適用性進行評價，旨在為該MSDA方法在化妝品行業(yè)的推廣應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

經(jīng)過對化妝品中霉菌和酵母菌檢驗MSDA方法的驗證研究表明，化妝品中霉菌和酵母菌檢驗MSDA方法在準(zhǔn)確度、精密度、定量限、線性、范圍、重現(xiàn)性等驗證參數(shù)上與《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》（2015版）標(biāo)準(zhǔn)方法檢測結(jié)果具有等效性，該方法耐用性良好，適用于所有供試化妝品的霉菌和酵母菌檢測。通過驗證研究及方法適用性試驗證明了3d檢驗MSDA方法切實可行，該方法縮短了檢測時間，提高了檢測效率，具有進一步推廣應(yīng)用前景。

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